細(xì)胞生命的終結(jié)有許多種方式，凋亡只是其中一種，所以要確保自己檢測(cè)到的的確是凋亡信號(hào)。上海東寰為您分析細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法！

細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法也有多種，如形態(tài)學(xué)檢測(cè)、磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V 法）、線粒體膜勢(shì)能檢測(cè)、DN***斷化檢測(cè)、TUNEL 法及 Caspase-3 活性檢測(cè)等，可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的方法。這里我們主要了解 Annexin V 法。

Annexin V 是一種分子量為 35～36 KD 的豐富的胞內(nèi)蛋白。Annexin V 屬于 Ca2+ 結(jié)合蛋白家族，可與磷脂（PL）發(fā)生可逆的 Ca2+ 依賴性結(jié)合，對(duì)磷脂酰絲氨酸（PS）具有高親和力。在健康細(xì)胞中，PS 主要位于質(zhì)膜的胞質(zhì)側(cè)，而在早期凋亡細(xì)胞中，PS 從質(zhì)膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)至外側(cè)，Annexin V 與暴露在細(xì)胞外環(huán)境的 PS 結(jié)合。

核酸染料碘化丙啶（PI）及 7 氨基-放線菌素 D（7-AAD）均具有高 DNA 結(jié)合常數(shù)，它們不能透過正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整細(xì)胞膜，但可以透過凋亡晚期和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染色。因此，將 Annexin V 與 PI 或 7-AAD 聯(lián)合使用，可以將凋亡早、晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。

Annexin V 可以與熒光素（FITC、PE）或 biotin 綴合，這種形式保留了 Annexin V 對(duì) PS 的高親和力，因此可以用流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。與 PI 不同，7-AAD 與 PE 和 FITC 的光譜重疊更小，因此，可以在多色分析中與 PE 和 FITC 標(biāo)記的抗體聯(lián)合使用。

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