上期我們主要講解了細(xì)胞凋亡的早期檢測方法,這期主要講解一下細(xì)胞凋亡晚期中,核酸內(nèi)切酶(某些Caspase的底物)在核小體之間剪切核DNA,產(chǎn)生大量長度在180-200 bp 的DNA的片段。
上期我們主要講解了細(xì)胞凋亡的早期檢測方法,這期主要講解一下細(xì)胞凋亡晚期中,核酸內(nèi)切酶(某些Caspase的底物)在核小體之間剪切核DNA,產(chǎn)生大量長度在180-200 bp 的DNA的片段。
1、凋亡 DNA Ladder 檢測試劑盒
細(xì)胞經(jīng)處理后,采用常規(guī)方法分離提純DNA,進(jìn)行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色,在凋亡細(xì)胞群中可觀察到典型的DNA ladder。Quick Apoptotic DNA Ladder Detection Kit可以快速(約1-2小時)、靈敏地檢測凋亡細(xì)胞中的DNA的片段。
2、TUNEL-based DNA 的片段分析試劑盒
細(xì)胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端,從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測。Apo-BrdUTM分析使用2種顏色的TUNEL方法用流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞中DNA條帶。采用的BrdU比生物素標(biāo)記的或地高辛(digoxigenylated)標(biāo)記的方法靈敏度更高。
3、Caspase分析試劑和試劑盒
Caspase在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要的作用,屬于天冬氨酸蛋白酶。其中caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子,它在凋亡信號傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。在正常狀態(tài)下,caspase家族都以無活性的酶原(30~50kD)形式表達(dá),Caspase酶原由原結(jié)構(gòu)域、大亞基(~20kD)和小亞基(~10kD )構(gòu)成。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時caspase可以被蛋白酶裂解,大亞基和小亞基形成活化的caspase。一些caspase活化后可以次序激其他caspase形成caspase級聯(lián)反應(yīng),促發(fā)細(xì)胞凋亡。
以上就是細(xì)胞凋亡晚期的一些檢測,希望上海東寰分享的內(nèi)容能對大家有所幫助,想要了解更多,歡迎致電咨詢。