上海東寰與您分享免疫沉淀技術(shù)
免疫沉淀技術(shù)是一種研究蛋白質(zhì)間交互作用的生物技術(shù)，這種技術(shù)是將蛋白質(zhì)視為抗原，并利用抗體與之進(jìn)行特異性結(jié)合的特性，來(lái)進(jìn)行研究。這項(xiàng)技術(shù)可用來(lái)將含有上千種不同蛋白質(zhì)的樣品中，分離和濃縮出特定蛋白質(zhì)。進(jìn)行免疫沉淀法時(shí)，抗體需要和一個(gè)受質(zhì)結(jié)合，下面就由上海東寰給大家簡(jiǎn)要介紹。
免疫沉淀技術(shù)是一種研究蛋白質(zhì)間交互作用的生物技術(shù)，這種技術(shù)是將蛋白質(zhì)視為抗原，并利用抗體與之進(jìn)行特異性結(jié)合的特性，來(lái)進(jìn)行研究。這項(xiàng)技術(shù)可用來(lái)將含有上千種不同蛋白質(zhì)的樣品中，分離和濃縮出特定蛋白質(zhì)。進(jìn)行免疫沉淀法時(shí)，抗體需要和一個(gè)受質(zhì)結(jié)合，下面就由上海東寰給大家簡(jiǎn)要介紹。
RIP 實(shí)驗(yàn)基本原理：
1. 用抗體或表位標(biāo)記物捕獲細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)中內(nèi)源性的RNA結(jié)合蛋白；
2. 防止非特異性的RNA的結(jié)合；
3. 免疫沉淀把RNA結(jié)合蛋白及其結(jié)合的RNA一起分離出來(lái)；
4.結(jié)合的RNA序列通過(guò)microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量測(cè)序（RIP-Seq）方法來(lái)鑒定。
免疫沉淀是基于傳統(tǒng)親和純化方法開發(fā)的，在含有目的抗原的細(xì)胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A-Beads （預(yù)先將Protein A固定結(jié)合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、ProteinA與抗體的FC的特異性，形成“抗原-抗體-ProteinA-Beads”復(fù)合物，清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白，檢測(cè)是否存在目的蛋白。與傳統(tǒng)的柱式親和純化相比，免疫沉淀的目標(biāo)是只分離足夠用于Western Blot或其他檢測(cè)方法檢測(cè)的蛋白質(zhì)。通?？梢詫⒁烟幚砗臀刺幚淼臉悠愤M(jìn)行比較，從而評(píng)估目標(biāo)蛋白的相對(duì)量。
在免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中，用于檢測(cè)的抗體可以是預(yù)固定的，或者是游離的。通常，預(yù)固定抗體法更適用于IP，但是，當(dāng)目標(biāo)蛋白濃度較低、抗體與抗原的結(jié)合親和力較弱的情況下，可以使用游離的抗體形成免疫復(fù)合物，效果會(huì)比較好。
以上就是上海東寰關(guān)于免疫沉淀技術(shù)的分享，希望能給大家提供到幫助，了解更多關(guān)于免疫沉淀技術(shù)的問(wèn)題歡迎來(lái)電咨詢。
RIP 實(shí)驗(yàn)基本原理：
1. 用抗體或表位標(biāo)記物捕獲細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)中內(nèi)源性的RNA結(jié)合蛋白；
2. 防止非特異性的RNA的結(jié)合；
3. 免疫沉淀把RNA結(jié)合蛋白及其結(jié)合的RNA一起分離出來(lái)；
4.結(jié)合的RNA序列通過(guò)microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量測(cè)序（RIP-Seq）方法來(lái)鑒定。
免疫沉淀是基于傳統(tǒng)親和純化方法開發(fā)的，在含有目的抗原的細(xì)胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A-Beads （預(yù)先將Protein A固定結(jié)合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、ProteinA與抗體的FC的特異性，形成“抗原-抗體-ProteinA-Beads”復(fù)合物，清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白，檢測(cè)是否存在目的蛋白。與傳統(tǒng)的柱式親和純化相比，免疫沉淀的目標(biāo)是只分離足夠用于Western Blot或其他檢測(cè)方法檢測(cè)的蛋白質(zhì)。通?？梢詫⒁烟幚砗臀刺幚淼臉悠愤M(jìn)行比較，從而評(píng)估目標(biāo)蛋白的相對(duì)量。
在免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中，用于檢測(cè)的抗體可以是預(yù)固定的，或者是游離的。通常，預(yù)固定抗體法更適用于IP，但是，當(dāng)目標(biāo)蛋白濃度較低、抗體與抗原的結(jié)合親和力較弱的情況下，可以使用游離的抗體形成免疫復(fù)合物，效果會(huì)比較好。
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