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實(shí)驗(yàn)干貨 | 常用分子生物學(xué)技術(shù)原理

上海東寰生物科技有限公司與您分享常用分子生物學(xué)技術(shù)原理。
實(shí)驗(yàn)干貨 | 常用分子生物學(xué)技術(shù)原理

1. 分子雜交與印跡技術(shù)

(1)探針是經(jīng)過特殊標(biāo)記,能與待測單鏈核酸分子互補(bǔ)結(jié)合的已知核酸片段

(2)印跡是將電泳分離后的大分子轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上,以便雜交的技術(shù)

(3)DNA印跡:Southern blotting,用于檢測基因組DNA

(4)RNA印跡:Northern blotting,主要用來檢測mRNA的表達(dá)水平

(5)蛋白質(zhì)印跡:Western blotting,用于檢測蛋白質(zhì)的水平

2. PCR技術(shù)

(1)反應(yīng)體系:單鏈DNA模板、特異性DNA引物、耐熱DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)、dNTPs底物、含Mg2+的緩沖液。

(2)反應(yīng)步驟:變性、復(fù)性、延伸

(3)逆轉(zhuǎn)錄PCR:即RT-PCR,在PCR之前先將單鏈mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。這是目前從RNA水平出發(fā)研究基因表達(dá)或獲得目的基因最有效的方法。

(4)應(yīng)用:目的基因的克隆、基因的體外突變、微量DNA或RNA擴(kuò)增、DNA序列測定、基因突變分析

3. 蛋白質(zhì)相互作用研究

酵母雙雜交技術(shù)、CoIP

4. DNA-蛋白質(zhì)相互作用

電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)、染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(ChIP)

5. 基因敲除

即gene knock-out,通過同源基因重組原理使得某個(gè)基因活性喪失,從而研究該基因功能的方法

來源:生化一點(diǎn)通