蛋白抽提/Western Blotting 技術(shù)服務(wù)

Western Blotting 技術(shù)服務(wù)
(DH1004)

 
一.服務(wù)內(nèi)容
1、蛋白提?。簭娜嘶騽游锛?xì)胞、組織，細(xì)胞等樣品中提取蛋白樣品。
2、蛋白定量：對樣品中蛋白進(jìn)行半定量分析。
3、Western Blot檢測
（1）電泳：聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）分離蛋白樣品。
（2）濕法轉(zhuǎn)印。
（3）雜交：用抗體鑒定膜上的特定蛋白。
（4）顯色：ECL熒光顯色，黑條帶白背景照片
4、提供蛋白內(nèi)參檢測（所有內(nèi)參抗體均不收取費(fèi)用）。
5、預(yù)實驗及正式實驗服務(wù)。
 
二. 樣品要求
1、細(xì)胞＞1×10^7；組織＞30mg；細(xì)菌濕重＞1mg等。
2、樣品蛋白濃度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/樣品。
3、建議提供目的蛋白陽性表達(dá)樣品（純蛋白、有陽性表達(dá)的細(xì)胞或組織、商品化的陽性對照產(chǎn)品等）作為陽性對照。
注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。
 
三. 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
 

四、客戶提供材料
1、樣品：新鮮或正確保存的樣品以及與樣品相關(guān)的必要資料（具有保密性的材料除外）。
2、目的蛋白相應(yīng)一抗：請您提供質(zhì)量保證的一抗（或委托我公司準(zhǔn)備）?？贵w的使用量通過預(yù)實驗后進(jìn)行確認(rèn)，原則上不回收使用一抗。
3、陽性對照樣品（盡量提供）。
4、相關(guān)文獻(xiàn)（可選）。
注：若要檢測磷酸化蛋白，請在2-3個月內(nèi)進(jìn)行，因為長時間保存的樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。
 
五、提交給客戶結(jié)果
1、預(yù)實驗顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式），預(yù)實驗采取3個一抗稀釋度，選取部分實驗樣本。
2、正式實驗顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式）。
3、完整實驗報告。
 
六、服務(wù)項目說明
1、提供的蛋白量與待檢測的目的蛋白數(shù)量有關(guān)，蛋白數(shù)量增加相應(yīng)的樣品量也要增加。
2、每張膜樣品數(shù)量為1-8個，不足8個以8個收取。9-16個樣品為2張膜，17-24個樣品為3張膜；以此類推。
舉例：7個樣品，1個目的蛋白，算1張膜；有9個樣品，1個目的蛋白，算2張膜；7個樣品，2個目的蛋白，算2張膜，有9個樣品，2個目的蛋白，算4張膜。
注：以上為一般算法。如果客戶樣品數(shù)量需要按照組別等來進(jìn)行上樣時，需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數(shù)。
3、選擇部分樣品進(jìn)行預(yù)實驗，參考目的蛋白一抗說明書進(jìn)行3個稀釋度的預(yù)實驗。
4、向客戶反饋預(yù)實驗結(jié)果，等待客戶確認(rèn)預(yù)實驗結(jié)果后確定是否進(jìn)行正式實驗。
5、提供內(nèi)參檢測為：β-actin，GAPDH等。
8、對條帶結(jié)果有特殊要求，請另詢價。
9、雙方簽訂合同后，收取70%首付后啟動預(yù)實驗。