BCA 蛋白定量檢測試劑盒
BCA 蛋白定量檢測試劑盒
BCA蛋白定量檢測試劑盒
（BCA Protein Assay
Kit）
產(chǎn)品信息：
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產(chǎn)品貨號 |
B00101-100 (500T) |
B00101-250 (1250T) |
B00101-500 (2500T) |
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BCA Solution A |
100ml |
250ml |
500ml |
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BCA Solution B |
3ml |
7.5ml |
15ml |
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蛋白標準品(BSA) |
5×1ml (2mg/ml) |
5×1ml (2mg/ml) |
5×2ml (2mg/ml) |
運輸與保存方法：
室溫運輸。試劑盒室溫保存即可，長期不用的蛋白標準品（BSA）也可放到4°C保存，有效期12個月。
產(chǎn)品描述：
BCA法是目前應用比較**的蛋白質(zhì)濃度定量測定方法。基于雙縮脲反應，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+，產(chǎn)生一種紫藍色復合物，在562nm處有高的吸光值，該反應產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。與Lowery法相比，BCA蛋白濃度測定法實現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測定的操作簡便、靈敏度高、快速和穩(wěn)定性佳。與Bradford法相比具有受去垢劑的影響較小等**優(yōu)勢。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。
產(chǎn)品特點：
1) 靈敏度高，檢測濃度下限達到5 μg/ml。
2) 速度快，比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。
3) 線性范圍廣，25-2000 μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性范圍。
4) 不受大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween
20，60，80等。
操作方法：
一、配制標準品和工作液
1、配制蛋白標準品（BSA）品系
注：標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液進行稀釋，這樣可以****降低溶液中各種成分的干擾。但是也可以用0.9%的NaCl或者1×PBS溶液進行稀釋。
BSA標準品的配制可參考表一：
表一、BSA標準品系配制（線性范圍25-2000μg/ml）
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管號 |
稀釋液體積（μl） |
2mg/ml BSA體積（μl） |
BSA終濃度（μg/ml） |
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A |
0 |
100 |
2000 |
|
B |
25 |
75 |
1500 |
|
C |
50 |
50 |
1000 |
|
D |
125 |
75 |
750 |
|
E |
150 |
50 |
500 |
|
F |
350 |
50 |
250 |
|
G |
375 |
25 |
125 |
|
H |
395 |
5 |
25 |
|
I |
400 |
0 |
0=Blank |
注：微孔板檢測每管需要100 μl標準品，如果用比色皿檢測，按3個重復計算，每個濃度至少配制300 μl。
如果樣品的濃度比較低，則可以按照以下加強試管的稀釋方案（線性范圍為5-250μg/ml）進行標準曲線的制作。
表二、BSA標準品系配制（線性范圍5-250μg/ml）
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管號 |
稀釋液體積（μl） |
BSA來源及體積（μl） |
BSA終濃度（μg/ml） |
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A |
350 |
50的原液 |
250 |
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B |
200 |
200的A管稀釋液 |
125 |
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C |
225 |
150的B管稀釋液 |
50 |
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D |
150 |
150的C管稀釋液 |
25 |
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E |
300 |
75的D管稀釋液 |
5 |
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F |
200 |
0 |
0 |
2、配制BCA工作液
1）計算所需要的總BCA工作液體積
總BCA工作液體積=（標準品+待測樣品）×重復數(shù)×每個樣品所需要的BCA工作液
注：微孔板檢測每個樣品加200μl BCA工作液，比色皿檢測時每個樣品加2.0ml BCA工作液。
2）配制BCA工作液：50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B（A:B=50:1）,充分混勻。
注：BCA試劑B加入后，溶液迅速混濁，通過混勻后立即變澄清。BCA工作液**現(xiàn)用現(xiàn)配，檢測前4小時之內(nèi)配制后裝入密封容器內(nèi)存放，試劑比較穩(wěn)定。
二、檢測方法
1、微孔板檢測方法
1）各取10 μl標準品和待測樣品加入到微孔板中。
注：樣品與工作液的比例可根據(jù)待測樣品的量而定，若樣品有限，可適量減少標準品和待檢測樣品的用量，該試劑盒的檢測范圍為25-2000 μg/ml。
2）每孔加入200 μl BCA工作液，振蕩充分混勻后，避光置于37°C，孵育30min。
3）冷卻至室溫，在酶標儀上的540~595nm波長范圍內(nèi)檢測吸光度，其中562nm波長的吸光度為**。
注：由于酶標板的光徑較短，需要更好的樣品與工作液的比率來獲得較好的檢測靈敏度；若檢測波長大于562nm，建議延長孵育時間，*長至2小時；
4) 根據(jù)BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即*終的讀數(shù)），繪制標準曲線（X-*終的OD562nm讀數(shù)， Y-蛋白濃度μg/ml）。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。
2、比色皿檢測方法
1）各取100 μl標準品和待測樣品加入到反應管中。
2）每孔加入2.0 ml BCA工作液，振蕩充分混勻后，避光置于37°C，孵育30min。
注：由于酶標板的光徑較短，需要更好的樣品與工作液的比率來獲得較好的檢測靈敏度；若檢測波長大于562nm，建議延長孵育時間，*長至2小時；
3）冷卻至室溫，在酶標儀上的540~595nm波長范圍內(nèi)檢測吸光度，其中562nm波長的吸光度為**。
注：由于酶標板的光徑較短，需要更好的樣品與工作液的比率來獲得較好的檢測靈敏度；若檢測波長大于562nm，建議延長孵育時間，*長至2小時；
4) 根據(jù)BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即*終的讀數(shù)），繪制標準曲線（X-*終的OD562nm讀數(shù)， Y-蛋白濃度μg/ml）。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。
