? 外泌體的提取方法有哪些？

  ① 經(jīng)典的超速離心法

  ② 柱純化法

  ③ 超濾法

  ④ 大分子聚合物沉降法

  ⑤ 磁珠免疫沉淀法

? 如何選擇一款合適的提取方式？

  ① 是否具備一臺(tái)超速離心機(jī)？是否不嫌麻煩、耐得住性子？

   為了完成一次密度梯度超速離心，需要整整一天時(shí)間來做各種操作：配制不同濃度的氯化銫、預(yù)裝密度梯度液、加樣、超離管配平（懂的自然懂）、超速離心 12～16 個(gè)小時(shí)，這些都不是最難的步驟，最難的就是離心后扎針取樣了！  

   有誰被扎了，還沒有取到樣的，再舉個(gè)手！師兄同情你 30 秒...

② 是否有高速離心機(jī)

  大概 90% 以上實(shí)驗(yàn)室都具備高速離心機(jī)，那么就僅考慮靠高速離心機(jī)的外泌體提取方法，比如大分子聚合沉降法或者超濾法，可購買基于大分子聚合物方法的試劑盒或者超濾管。

③ 購買商品化試劑盒時(shí)該如何選？

  最重要的是要了解單位體積樣品的抽提費(fèi)用是多少，做好預(yù)算，要不太貴了老板也會(huì)心疼經(jīng)費(fèi)的！苦思冥想申請(qǐng)個(gè)基金也不容易，勤儉持家才能長(zhǎng)長(zhǎng)久久！

? 外泌體提取前做哪些工作準(zhǔn)備？

  最重要的是樣品前期處理工作，這個(gè)做好了提取才有意義，才有科學(xué)價(jià)值。

  ① 迅速性原則：要最大限度的縮短從樣本采集到實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。

  ② 低溫原則：所取樣本離體后，保證在實(shí)驗(yàn)前始終處于 -70℃ 以下，以避免外泌體降解。

  ③ 必須的預(yù)處理操作：針對(duì)細(xì)胞上清液樣品、血清或者血漿樣品、尿液、腦脊液、腹水等樣品，需要先做低速離心 (< 3,000 rpm) 去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片后，再將樣品存放在 -80℃ 冰箱中。

? 提取的外泌體如何保存呢？

  提取好的外泌體凍存在 -80℃ 冰箱中不就完事了嗎？有很多人疑惑。

當(dāng)然不是，當(dāng)富集后的外泌體放到 -80℃ 冰箱凍存后，就如同冰凍丸子一樣，它們一個(gè)挨著一個(gè)，粘在一起，即使解凍后也未必會(huì)分的很開。

  使用這樣融化后的外泌體去做電鏡和粒徑檢測(cè)的時(shí)候就會(huì)遇到一些問題：形態(tài)太丑、成團(tuán)或者黏連、顆粒太大，超過外泌體的官方標(biāo)準(zhǔn)尺寸，這些都是由于外泌體冷凍后造成的，都是客觀情況。