溫和型干細胞消化液

溫和型干細胞消化酶專門用于干細胞的消化，包括臍帶間充質干細胞，脂肪間充質干細胞，
胚胎干細胞（ES）等。傳統(tǒng)胰蛋白酶只要接觸到細胞，就持續(xù)不斷的切割蛋白的精氨酸及賴氨
酸C末端形成的肽鍵。溫和型干細胞消化酶與胰蛋白酶的作用機理不同，它只消化細胞與細胞之
間，以及細胞與培養(yǎng)瓶之間的細胞外基質，而不損傷細胞膜的完整性，因此消化作用溫和，對
干細胞的損害極小。即使消化時間超過10分鐘，細胞活率仍可保持90%以上，對干細胞的后續(xù)
傳代也幾乎沒有影響，減少了對操作人員技能的要求。

溫和型干細胞消化酶

產品名稱：溫和型干細胞消化酶產品規(guī)格：100ml
產品貨號：JXS0501 儲存條件：2-8℃保存，20℃長期保存

產品簡介

產品特點

1、即用型，無需配制，4℃保存。
2、操作便利，無需消化終止，細胞存活率高。
3、成分明確，純人工合成，無任何動物源成分。
4、安全性高，更適合臨床研究及藥物申報用途。
5、避免了消化過度，使大規(guī)模干細胞生產成為可能。

細胞消化步驟

一、細胞消化前準備(以T25瓶為例)

1、觀察貼壁細胞長至80%-90%左右，棄去細胞培養(yǎng)液。

2、用5ml無鈣鎂的HBSS溶液或PBS清洗貼壁細胞，棄去清洗液。

二、細胞消化過程(以T25瓶為例)

1、向T25瓶中加入1ml干細胞溫和消化酶，置于37度培養(yǎng)箱中消化細胞。

2、約3min后，細胞變圓，立即加入5mLPBS溶液進行稀釋。

3、將上述6mL含細胞液體轉移至離心管中，置于離心機中離心1000rpm，3min

4、去除離心管中的上清液。

5、根據接下來的應用目的加入干細胞培養(yǎng)基(細胞傳代用途)或細胞凍存液(細胞凍存用途)。

常見問題

Q：為什么要開發(fā)干細胞溫和消化酶產品？
A：消化過度與生長過密是干細胞培養(yǎng)失敗的前兩大原因。在生產級的大規(guī)模培養(yǎng)中，消化過度更是
一個難以控制的工藝難題。溫和消化酶就是為了解決這個問題而設計的：在該產品的消化時間挑
戰(zhàn)實驗中，浸潤在溫和酶中長達30min的干細胞，細胞活率均能保持在90%以上，表型正常，且后
續(xù)傳代正常

Q：干細胞溫和消化酶的保存溫度條件是2-8℃。我如果-20℃保存，會不會更好？
A：該酶蛋白結構穩(wěn)定，在2-8℃條件下也可穩(wěn)定保存。若放置-20℃環(huán)境，應避免反復凍融問題，否則
會導致該酶活性下降，細胞消化時間延長。建議分裝后置于-20℃長期保存。

Q：用無血清培養(yǎng)基及含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的干細胞，在使用溫和酶消化方面有什么異同？
A：相同之處是：無論使用何種培養(yǎng)基，在消化前均需要使用無鈣鎂離子的緩沖液沖洗細胞。
不同之處：如果使用無血清培養(yǎng)基，清洗一次即可。如果使用血清培養(yǎng)基，應當連續(xù)清洗細胞三
次，以確保無血清殘留，否則消化時間會變長。

Q：在消化時間方面，溫和消化酶與傳統(tǒng)胰酶有什么差別？
A：溫和型干細胞消化酶在消化時間上要稍長一些。一般消化干細胞需要2-5min左右的時間?？筛鶕?br/> 細胞狀態(tài)及種類適當延長消化時間，且不會對細胞活性產生影響。傳統(tǒng)胰酶要嚴格控制消化時間

Q：溫和消化酶消化細胞后，需要添加培養(yǎng)基或胰酶抑制劑終止消化過程嗎？
A：不需要。細胞變圓后添加細胞培養(yǎng)上清或PBS溶液稀釋即可。

Q：添加完細胞培養(yǎng)上清稀釋后，可不離心去除消化酶嗎？
A：不可以。殘留的消化酶會影響后續(xù)干細胞的培養(yǎng)過程，會導致干細胞的形態(tài)變化。