免疫熒光技術(shù)服務(wù)
免疫熒光技術(shù)服務(wù)
(DH0014)
一、服務(wù)介紹
免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique)又稱熒光抗體技術(shù),是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展*早的一種。將抗原或抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記,標(biāo)記的抗原或標(biāo)記的抗體與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng) 后,測(cè)定復(fù)合物中的熒光素,這種免疫技術(shù)稱為免疫熒光素技術(shù)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)分直接法、夾心法、間接法和補(bǔ)體法。
二、服務(wù)內(nèi)容及價(jià)格
服務(wù)編號(hào)
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服務(wù)內(nèi)容
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服務(wù)價(jià)格
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服務(wù)周期(工作日)
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DH0014-01
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免疫熒光單標(biāo)記檢測(cè)
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咨詢
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咨詢
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DH0014-02
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免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)
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咨詢
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咨詢
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三、客戶提供
1、細(xì)胞株或細(xì)胞爬片。注:細(xì)胞爬片不宜太密;
2、熒光檢測(cè)所用的抗體
3、實(shí)驗(yàn)前,客戶需告知具體的細(xì)胞處理方式及詳細(xì)要求。
注:若有特殊處理的樣品,請(qǐng)盡可能出示相關(guān)材料(具有保密性的材料除外)。
四、服務(wù)流程
免疫熒光單標(biāo)記方法
免疫熒光單標(biāo)記是指只標(biāo)記一種蛋白質(zhì)分子,方法比較簡(jiǎn)單,只要按照染色步驟去做,通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇,固定液選擇的合適與否,可能會(huì)直接影響染色結(jié)果。具體染色方法如下。
1、所需材料與試劑
a, 培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達(dá)到60%-70%的細(xì)胞。
b, 一抗、FITC或TRITC標(biāo)記的二抗。
c, 4%多聚甲醛固定液或冷**固定液 (-20℃預(yù)冷20 min)。
d, 封閉液。
e, 0.01mol/LPBS緩沖液。
2、染色方法
a, 取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片,用0.01MPBS洗2-3遍。
b, 加入4%多聚甲醛試問固定30 min
c. 加入0.05%的Tritonx-100, 37℃, 5min,PBS洗兩次,5min/次
d. 加入含0.5%NS、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。
e. 去封閉液,直接加入一抗,37℃孵育1 h或4℃過夜??贵w以0.01 mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定)。
f. PBS洗三次,10min/次
g. 加入FITC-二抗或TRITC-二抗,37℃,孵育1h。
h. PBS洗三次,10min/次,用濾紙吸干。
i. 50%甘油(PBS配制)封片。
j. 免疫熒光顯微鏡下觀察,或于4℃避光保存。
免疫熒光雙標(biāo)記方法
免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子,當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些,應(yīng)注意所用的一抗是來自不同種屬動(dòng)物的兩種特異性抗體(例如:A抗體為多克隆抗體,來自家兔;B抗體為單克隆抗體,來自小鼠)。其次,兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊,且盡量遠(yuǎn)離,通??梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5,或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下,染色時(shí)兩種一抗可以同時(shí)孵育,然后可以同時(shí)孵育兩種二抗。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱,而另一種顏色比較強(qiáng)時(shí),應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。其他步驟同免疫熒光單標(biāo)記。
五、提交給客戶結(jié)果
基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析,熒光顯微鏡拍攝
六、服務(wù)項(xiàng)目說明
1.實(shí)驗(yàn)周期:具體需要根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。
2.對(duì)實(shí)驗(yàn)有特殊要求,請(qǐng)另詢價(jià)。
3.雙方簽訂合同后,收取50%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。
七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示