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大鼠氣管平滑肌細(xì)胞

大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞分離自支氣管組織;支氣管(Bronchi),是指由支氣管分出的各級(jí)分枝,由支氣管分出的一級(jí)支氣管,即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較,前者較細(xì)長(zhǎng),走向傾斜;后者較粗短,走向較前者略直,所以經(jīng)支氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管。支氣管和支氣管還有以區(qū)別就是,支氣管是以“C”型的支氣管軟骨為支架,而支氣管不是。支氣管平滑肌細(xì)胞主要功能:①支氣管平滑肌細(xì)胞能維持支氣管張力,保持支氣管形態(tài);②支氣管平滑肌特異的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和調(diào)節(jié)機(jī)制是支氣管正常生理功能的基礎(chǔ);③支氣管平滑肌通過(guò)分泌細(xì)胞因子和趨化因子等促炎介質(zhì),發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。支氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。

大鼠氣管平滑肌細(xì)胞分離培養(yǎng)


簡(jiǎn)介

平滑肌(細(xì)胞)雖有如斧足類(lèi)的閉殼肌和足系牽引肌等是由平行走向長(zhǎng)纖維狀細(xì)胞(平滑肌纖維)所構(gòu)成,但多數(shù)的平滑肌則是由長(zhǎng)紡錘形(脊椎動(dòng)物的內(nèi)臟肌長(zhǎng)不到1毫米)的單核細(xì)胞構(gòu)成;

【材料】

培養(yǎng)皿,手術(shù)剪,彎頭手術(shù)鑷,10%FBS的DMEM,雙抗PBS或Hanks,75%酒精;

【方法】

1)75%酒精浸泡SD大鼠;

2)開(kāi)脖頸、胸腔,取出氣管,泡雙抗PBS;

3)去除食管和其他組織,從軟骨環(huán)一側(cè)剪開(kāi)氣管,彎頭鑷子橫向刮氣管內(nèi)外層,留中層平行條紋的氣管平滑肌組織;

4)組織移入含培液EP管,剪碎組織漂洗,800R/3min離心,重復(fù)3次;

5)取組織塊貼壁于培養(yǎng)皿,干貼1-2h,補(bǔ)上培液37°培養(yǎng);

【培養(yǎng)】

DMEM培養(yǎng)基(10%FBS)

圖為SD大鼠氣管平滑肌細(xì)胞P1代

【鑒定】

免疫熒光:

陽(yáng)性:Desmin、α-SMA;

SD-氣管SMC熒光鑒定-01


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