兔骨骼肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)

【簡(jiǎn)介】

骨骼肌的一般形態(tài)特征肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方，肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維；

【材料】

細(xì)胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、10%FBS的DMEM培養(yǎng)基、PBS緩沖液；

【方法】

1）兔處死，取胸大肌約1cm³,并將其剪成1mm³大小的肌小粒。

2）反復(fù)用緩沖液洗去血細(xì)胞,將肌小粒小心貼附于細(xì)胞培養(yǎng)皿，將皿底向上輕置于37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中；

3）2~4h后輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿,補(bǔ)足培液使肌小粒浸浴于培養(yǎng)液中，3d換液一次,待細(xì)胞長(zhǎng)滿即可傳代；

【培養(yǎng)】

DMEM培養(yǎng)基（10%FBS）

【鑒定】

1）免疫熒光：

2）陽性：肌蛋白（a-Actin）、結(jié)蛋白（Desmin）；