人臍動脈內(nèi)皮細胞

一、產(chǎn)品詳情：
1.    產(chǎn)品名稱：人臍動脈內(nèi)皮細胞，Human Umbilical Artery Endothelial Cells
2.    組織來源：人臍動脈組織
3.    細胞形態(tài)：細胞貼壁生長，呈現(xiàn)鋪路石狀鑲嵌排列，細胞為扁平多角形，辯解**，包漿豐富
4.    發(fā)貨形式：新鮮原代細胞或凍存原代細胞
5.    細胞簡介：本公司生產(chǎn)的人臍動脈內(nèi)皮細胞采用膠原酶消化制備而來，細胞總量約為5×10⁵個/瓶，細胞純度可達90%以上，且不含HIV-1，HBV，HCV、支原體、細菌、酵母和**等。
6.    注意事項：該細胞只可用于科研。

二、產(chǎn)品手冊
產(chǎn)品介紹：
       人臍動脈內(nèi)皮細胞分離自臍帶動脈，一般用于生理學(xué)和藥理學(xué)研究，例如大分子轉(zhuǎn)運、血液凝固、血管發(fā)生和纖維蛋白溶解等等。

質(zhì)量控制：
       本產(chǎn)品經(jīng)過了**/細菌、支原體、內(nèi)**檢測。
       本產(chǎn)品還經(jīng)過細胞復(fù)蘇活力檢測，細胞周期檢測，分化潛能鑒定。
       本產(chǎn)品經(jīng)過光鏡檢測形態(tài)，經(jīng)Western blot檢測蛋白標記物的表達鑒定。
       該產(chǎn)品*提供給進一步科研使用，不可應(yīng)用于臨床**等其他方面。

細胞相關(guān)操作
       細胞操作都需嚴格按照無菌操作進行。

收到復(fù)蘇好的貼壁細胞的處理方法：
1.    先從外包裝盒中拿出細胞瓶，在細胞瓶表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；
2.    在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，并確定是否染菌，如有染菌，請立即拍照，并將細胞丟棄；
3.    將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時；
4.    倒掉多余的培養(yǎng)基，留正常體積的培養(yǎng)基；
5.    重新將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜；
6.    第二天傳代。

收到凍存細胞的處理方法：
1.    37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.    從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（注意：解凍后不要繼續(xù)暖細胞）
3.    在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞，1000rpm離心5分鐘；
4.    棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻；
5.    置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（注意：培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊）；
6.    第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞傳代：
1.    當(dāng)細胞融合度達到90%以上時，給細胞傳代；
2.    37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
3.    在超凈臺中，棄培養(yǎng)基，加入2-5ml PBS清洗細胞后，再加入1ml胰酶消化細胞；
4.    顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，加入5ml培養(yǎng)液終止消化；
5.    用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細胞，并輕輕吹打?qū)⒓毎瞪ⅲ?br/>6.    將細胞移入離心管中，1000rpm離心5分鐘；
7.    棄上清，加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25瓶中（確保細胞貼壁后融合度在25-50%之間），細胞密度在1×10⁴個/cm²（2.5×10⁵ Cells/T25瓶），混勻細胞懸液，確保細胞均勻分布；
8.    將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞凍存：
1.    37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.    消化細胞后給細胞計數(shù)；
1)   洗凈晾干血小板計數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片完全覆蓋計數(shù)區(qū)；
2)   充分混勻細胞，取少量(0.1-0.5ml)細胞懸液與等體積的染色液臺盼藍混合，移液器吹吸混合均勻，用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細胞，以細胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；
3)   顯微鏡下，計數(shù)四個計數(shù)區(qū)的總細胞數(shù)目，無活性細胞染成藍色，活細胞不被染色；
4)   細胞密度=細胞總數(shù)/4×10000×2；這里10000是不變的，因為計數(shù)的細胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm，即10^-4cm³計數(shù)池內(nèi)，1cm³=1ml，將四個計數(shù)區(qū)的細胞數(shù)目除以4取平均數(shù)，乘以2是補償加等體積臺盼藍形成的稀釋。
5)   細胞活性=活細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100%
注：細胞密度高時，可調(diào)整細胞懸液和臺盼藍的比例，計數(shù)時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。
3.    當(dāng)細胞密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時，可以凍存細胞。
4.    在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管，1000rpm離心5分鐘；
5.    棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細胞，并調(diào)整細胞密度為1-3×10⁶/ml；
6.    將細胞懸液分裝到凍存管中（1-1.5ml/管）；
7.    將裝有細胞的凍存管置于-20°C放1-2小時后，-80°C過夜后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。