人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

一、產(chǎn)品詳情：
1.    產(chǎn)品名稱：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells  貨號：PC-H-18101
2.    組織來源：人臍靜脈組織
3.    細(xì)胞形態(tài)：細(xì)胞貼壁生長，呈現(xiàn)鋪路石狀鑲嵌排列，細(xì)胞為扁平多角形，辯解**，包漿豐富
4.    發(fā)貨形式：新鮮原代細(xì)胞或凍存原代細(xì)胞
5.    細(xì)胞簡介：本公司生產(chǎn)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10⁵個/瓶，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含HIV-1，HBV，HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和**等。
6.    注意事項：該細(xì)胞只可用于科研。

二、產(chǎn)品手冊
產(chǎn)品介紹：
      人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自臍帶靜脈，一般用于生理學(xué)和藥理學(xué)研究，例如大分子轉(zhuǎn)運、血液凝固、血管發(fā)生和纖維蛋白溶解等等。

質(zhì)量控制：
       本產(chǎn)品經(jīng)過了**/細(xì)菌、支原體、內(nèi)**檢測。
       本產(chǎn)品還經(jīng)過細(xì)胞復(fù)蘇活力檢測，細(xì)胞周期檢測，分化潛能鑒定。
       本產(chǎn)品經(jīng)過光鏡檢測形態(tài)，經(jīng)Western blot檢測蛋白標(biāo)記物的表達(dá)鑒定。
       該產(chǎn)品*提供給進(jìn)一步科研使用，不可應(yīng)用于臨床**等其他方面。

產(chǎn)品特性：
       在進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞實驗時，通常選用的細(xì)胞模型為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，而不是直接采用靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞或者動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞。原因是臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有干細(xì)胞的潛能，理論上可以傳代50-60次，且具有血管生成、遷移等特點。

細(xì)胞相關(guān)操作
        細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行。
收到復(fù)蘇好的貼壁細(xì)胞的處理方法：
1.    先從外包裝盒中拿出細(xì)胞瓶，在細(xì)胞瓶表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；
2.    在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，并確定是否染菌，如有染菌，請立即拍照，并將細(xì)胞丟棄；
3.    將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時；
4.    倒掉多余的培養(yǎng)基，留正常體積的培養(yǎng)基；
5.    重新將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜；
6.    第二天傳代。
收到凍存細(xì)胞的處理方法：
1.    37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.    從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（注意：解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）
3.    在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5分鐘；
4.    棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻；
5.    置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（注意：培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊）；
6.    第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代：
1.    當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時，給細(xì)胞傳代；
2.    37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
3.    在超凈臺中，棄培養(yǎng)基，加入2-5ml PBS清洗細(xì)胞后，再加入1ml胰酶消化細(xì)胞；
4.    顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開始脫離瓶壁時，加入5ml培養(yǎng)液終止消化；
5.    用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；
6.    將細(xì)胞移入離心管中，1000rpm離心5分鐘；
7.    棄上清，加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25瓶中（確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間），細(xì)胞密度在1×10⁴個/cm²（2.5×10⁵ Cells/T25瓶），混勻細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞均勻分布；
8.    將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存：
1.    37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.    消化細(xì)胞后給細(xì)胞計數(shù)；
1)   洗凈晾干血小板計數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片完全覆蓋計數(shù)區(qū)；
2)   充分混勻細(xì)胞，取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺盼藍(lán)混合，移液器吹吸混合均勻，用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞，以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；
3)   顯微鏡下，計數(shù)四個計數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù)目，無活性細(xì)胞染成藍(lán)色，活細(xì)胞不被染色；
4)   細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2；這里10000是不變的，因為計數(shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm，即10^-4cm³計數(shù)池內(nèi)，1cm³=1ml，將四個計數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)目除以4取平均數(shù)，乘以2是補償加等體積臺盼藍(lán)形成的稀釋。
5)   細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%
注：細(xì)胞密度高時，可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺盼藍(lán)的比例，計數(shù)時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。
3.    當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時，可以凍存細(xì)胞。
4.    在超凈臺中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm離心5分鐘；
5.    棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為1-3×10⁶/ml；
6.    將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中（1-1.5ml/管）；
將裝有細(xì)胞的凍存管置于-20°C放1-2小時后，-80°C過夜后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

細(xì)胞檢測結(jié)果分析：
利用流式細(xì)胞儀對分選的原代HUVECs進(jìn)行鑒定。vWF和CD31的表達(dá)呈陽性，而a-SMA以及CD45的表達(dá)呈陰性。

以及采用CD31抗體的免疫熒光檢測結(jié)果顯示CD31蛋白熒光陽性。
圖片如下：