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兔纖維環(huán)干細胞

從兔椎體中分離出原代兔纖維細胞進行培養(yǎng)、鑒定


兔纖維環(huán)干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定

 


 

一、材料:

3-8周齡、手術剪、手術鑷、75%酒精、雙抗PBS、M199、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、干細胞專用培養(yǎng)液;

 

二、方法:

1)下取白兔的椎體,剔除周圍的肌肉和韌帶,完整取出各段的椎間盤,將其放入含有5%雙抗低糖DMEM培養(yǎng)基中,將椎間盤移至超凈臺中,將髓核移除,獲得的纖維環(huán)組織;

2)PBS清洗3遍 ,將其剪成1mm×1mm×1mm大小的組織,加入質量濃度為0.2%I型膠原酶,放置于37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱中 每隔1h吹打1次,待組織塊完全消化后終止消化使用200目網篩過濾

3)PBS重懸,1000r/min離心 5 min,重復2次,種盤;

 


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