間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒
使用說明書

       間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒是我們自主研發(fā)的一款用于間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化的試劑盒，可用于多種組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂誘導(dǎo)分化，比如骨髓、臍帶以及脂肪等間充質(zhì)干細(xì)胞。該產(chǎn)品只能用于科學(xué)研究，不能用于臨床診斷、以及其他的用途。

產(chǎn)品組分

 操作步驟
一、間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的準(zhǔn)備
1. 本產(chǎn)品為試劑盒，使用前需將試劑盒內(nèi)各成分試劑于4°C解凍，直至完全溶解后，將各試劑組分按照順序混勻。
2. 為了保證試劑的使用效果，請(qǐng)將低于200 μl的添加劑EP管進(jìn)行短暫離心，使試劑全部收集至管底，并用少量培養(yǎng)基溶液多次洗滌管子，很大程度降低添加劑成分的損失。
3. 按照上表首先進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞維持培養(yǎng)基的配制，即將維持培養(yǎng)添加劑I和維持培養(yǎng)添加劑II全部加入到間充質(zhì)干細(xì)胞**培養(yǎng)基中，混合均勻后做好標(biāo)識(shí)為“維持培養(yǎng)基MC1”即可，置于2-8°C保存。
4. 然后從步驟3中配制好的維持培養(yǎng)基中取出20ml，然后分別將誘導(dǎo)成脂分化添加劑III、誘導(dǎo)成脂分化添加劑IV以及誘導(dǎo)成脂分化添加劑V全部加入到20ml維持培養(yǎng)基中，混合均勻，并用少量培養(yǎng)基多次洗滌管子，以保證培養(yǎng)基的效果，做好標(biāo)識(shí)為“誘導(dǎo)成脂分化培養(yǎng)基MC2”即可，置于2-8°C保存。
二、間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化操作指導(dǎo)步驟
1. 將接種好的間充質(zhì)干細(xì)胞置于37°C，5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。建議以2-3×10^4 cells/cm2的細(xì)胞密度接種于六孔板中。每孔加入2ml的干細(xì)胞專屬培養(yǎng)基。
注意：間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)需要專屬的培養(yǎng)基以保證干細(xì)胞的全能性及分化潛能。
2. 當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到符合預(yù)期時(shí)，小心將孔內(nèi)的培養(yǎng)基全部吸走，向六孔板中加入2ml 誘導(dǎo)成脂分化培養(yǎng)基MC2，進(jìn)行誘導(dǎo)。

3. 96小時(shí)后（第四天）撤去誘導(dǎo)成脂分化培養(yǎng)基MC2，用37°C預(yù)熱的1×PBS緩沖液洗滌細(xì)胞表面2次后，替換為維持培養(yǎng)基MC1繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，并每三天換液（MC1）一次，直至脂滴變得足夠大而飽滿，即可結(jié)束誘導(dǎo)。一般而言，至第14天時(shí)，80%以上的細(xì)胞將分化成成熟的脂肪細(xì)胞。

4. 仔細(xì)觀察細(xì)胞誘導(dǎo)分化的過程，并記錄細(xì)胞分化情況，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色和后續(xù)鑒定。
三、油紅O染色液的使用
當(dāng)您的成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，可進(jìn)行油紅O染色確定誘導(dǎo)效果（本公司提供油紅O染色試劑盒）
1. 吸走孔板里的培養(yǎng)基后，用1×PBS緩沖液沖洗細(xì)胞2次。
2. 加入4%中性甲醛溶液（覆蓋細(xì)胞表面即可），室溫固定細(xì)胞30分鐘。
3. 細(xì)胞固定期間，可配制油紅O工作液。配制方法如下：油紅O溶液：蒸餾水=3：2，混勻后用中性濾紙過濾備用。
4. 吸走甲醛溶液，用1×PBS緩沖液沖洗2遍。
5. 以六孔板為例，每孔加入1ml油紅O工作液，室溫染色30分鐘。
6. 吸走油紅O工作液，用1×PBS緩沖液沖洗2遍，把背景雜質(zhì)洗干凈，即可在顯微鏡下觀察誘導(dǎo)和染色效果。