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大鼠耳軟骨細(xì)胞細(xì)胞分離培養(yǎng)

軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層,單個(gè)分布,體積較小,呈橢圓形,長(zhǎng)軸與軟骨表面平行,越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形,細(xì)胞核圓形或卵圓形,染色淺,細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性,常見數(shù)量不一的脂滴。

大鼠耳軟骨細(xì)胞細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定

簡(jiǎn)介

軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層,單個(gè)分布,體積較小,呈橢圓形,長(zhǎng)軸與軟骨表面平行,越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形,細(xì)胞核圓形或卵圓形,染色淺,細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性,常見數(shù)量不一的脂滴。

【材料】

手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、PBS、雙抗、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、II型膠原酶、胰蛋白酶。

【方法】

1)將耳軟骨收集在PBS中反復(fù)清洗,剪成lmm×1mm×1mm左右的組織塊 ,轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管中。

2)加入0.25%胰蛋白酶消化30min反復(fù)洗滌、離心。

3)加入2mg/mlII型膠原酶溶液置于37℃水浴中輕微振蕩消化 ,直至軟骨組織塊基本消失、溶液變混濁為止,一般需 6~8h。

4)剩下未消化的組織用1mg/mlII型膠原酶37℃震蕩消化過液,一般需要16~18個(gè)小時(shí)。

【培養(yǎng)】

軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)液:DMEM/F12活性成分:1%ITS、20ng/mL肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、5-10%胎牛血清(FBS)、40μg/mL維生素C(L-抗壞血酸)。

【鑒定】

1)免疫熒光鑒定

II型膠原蛋白抗體(Collagen II)。

SD軟骨-光鏡-01

SD耳軟骨-熒光鑒定- (2)-01


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