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大鼠胃Cajal間質(zhì)細(xì)胞

大鼠胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞分離自胃腸道組織;胃腸道指的是從胃至肛門的消化管,包括胃、小腸、大腸等部位。其中腸是消化管中最長(zhǎng)的一段,也是功能最重要的一段。胃腸道是消化系統(tǒng)的主要器官,它會(huì)攝取足夠的水和人體所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)關(guān)節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu)。ICC 分布于環(huán)行肌細(xì)胞之間,環(huán)行肌層的內(nèi)表面及環(huán)行肌層與縱行肌層之間,該細(xì)胞往往與神經(jīng)纖維末梢及神經(jīng)束伴隨存在,并由許多的縫隙連接緊密連接在一起。存在于肌細(xì)胞之間的Caial間質(zhì)細(xì)胞的形狀較圓,存在于環(huán)行肌層內(nèi)表面的Caial間質(zhì)細(xì)胞的形狀則為細(xì)長(zhǎng)形。ICC是胃腸道慢波活動(dòng)的起搏器和傳導(dǎo)者,在神經(jīng)肌肉信號(hào)傳遞中起調(diào)節(jié)作用,且與某些胃腸動(dòng)力性疾病的發(fā)生有相關(guān)性。

Cajal間質(zhì)細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定

 

材料

成年大鼠、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗、兩性霉素、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、M199、PBSD-Hanks、酶消化液(0.1%II型膠原酶、ATP、胰蛋白酶抑制、SCF(干細(xì)胞生長(zhǎng)因子)、Ficoll 400;

方法

1)處死鼠,取胃竇組織,去除粘膜層和粘膜上皮D-Hanks清洗。

2)將胃肌條組織剪成1mm×1mm×1mm組織碎片,加入酶消化60min。

3)消化液渾濁后終止消化,過(guò)200目細(xì)胞網(wǎng)篩,1000rpm10min離心,去上清。沉淀重復(fù)離心2

4)加入Ficoll 400,梯度分離,純化細(xì)胞。

4)細(xì)胞沉淀種明膠包被的培養(yǎng)皿中,48h換液。

【鑒定】

1)免疫熒光:

陽(yáng)性:c-kit

 


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