大鼠胃Cajal間質(zhì)細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定
【材料】
成年大鼠、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗、兩性霉素、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、M199、PBS、D-Hanks、酶消化液(0.1%II型膠原酶、ATP、胰蛋白酶抑制、SCF(干細(xì)胞生長(zhǎng)因子)、Ficoll 400;)
【方法】
1)處死大鼠,取胃竇組織,去除粘膜層和粘膜上皮D-Hanks清洗。
2)將胃肌條組織剪成1mm×1mm×1mm組織碎片,加入酶液消化60min。
3)消化液渾濁后終止消化,過(guò)200目細(xì)胞網(wǎng)篩,1000rpm,10min離心,去上清。沉淀重復(fù)離心2次。
4)加入Ficoll 400,梯度分離,純化細(xì)胞。
4)細(xì)胞沉淀種明膠包被的培養(yǎng)皿中,48h換液。
【鑒定】
1)免疫熒光:
陽(yáng)性:c-kit