小鼠結(jié)腸平滑肌細胞分離培養(yǎng)

【簡介】

平滑肌（細胞）雖有如斧足類的閉殼肌和足系牽引肌等是由平行走向長纖維狀細胞（平滑肌纖維）所構(gòu)成，但多數(shù)的平滑肌則是由長紡錘形（脊椎動物的內(nèi)臟肌長不到1毫米）的單核細胞構(gòu)成；

【材料】

雙抗PBS、鑷子、剪刀、75%酒精、20%FBS的DMEM；

【方法】

1）取小鼠一只, 實驗時斷椎處死。在無菌條件下快速自肛門上2 cm 取結(jié)腸10 cm 左右,雙抗PBS中反復(fù)灌腸沖洗,移入含300 U/ ml 青霉素、300 U/ ml鏈霉素的緩沖液中浸泡,腸段內(nèi)外各15 min 。

2）體視顯微鏡下沿腸系膜對側(cè)縱行切開腸段,仔細地刮除粘膜層,翻轉(zhuǎn)至側(cè),小心地撕去腸系膜,再仔細地刮去漿膜層。

3）反復(fù)用鑷子側(cè)角刮腸段的內(nèi)、外層,直至余下的組織層在體視顯微鏡下觀察到呈透明的一層為止。

4）將組織層剪碎, 加入雙抗PBS離心,棄上清。

5）加500ul的10%FBSD的DMEM 培養(yǎng)液重懸組織碎塊。

6）組織移入培養(yǎng)瓶中,放入培養(yǎng)箱內(nèi)2h干貼，組織貼壁后補齊培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),以后每3～4 天換液1 次，5d左右可見細胞爬出擴增。

【培養(yǎng)】

20%FBS的DMEM

圖為原代結(jié)腸平滑肌細胞培養(yǎng)

【鑒定】

1）免疫熒光：

陽性：肌動蛋白-α（α-SMA/α-actin）、結(jié)蛋白（Desmin）；