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小鼠甲狀腺細(xì)胞

甲狀腺是脊椎動(dòng)物非常重要的腺體,屬于內(nèi)分泌器官,位于哺乳動(dòng)物頸部甲狀軟
骨下方,氣管兩旁;其中,甲狀腺上皮細(xì)胞 ( 也稱為濾泡細(xì)胞或主要細(xì)胞 ) 在甲狀腺細(xì)胞中是負(fù)責(zé)生產(chǎn)和分泌甲狀腺激素,包括四碘甲狀腺原氨酸 (T4) 和三碘甲腺原氨酸 (T3),具有 調(diào)節(jié)動(dòng)物體生長發(fā)育、基礎(chǔ)代謝及繁殖活動(dòng)的重要生理功能。

甲狀腺細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定

 

簡介

甲狀腺是脊椎動(dòng)物非常重要的腺體,屬于內(nèi)分泌器官,位于哺乳動(dòng)物頸部甲狀軟

骨下方,氣管兩旁;其中,甲狀腺上皮細(xì)胞 ( 也稱為濾泡細(xì)胞或主要細(xì)胞 ) 在甲狀腺細(xì)胞中是負(fù)責(zé)生產(chǎn)和分泌甲狀腺激素,包括四碘甲狀腺原氨酸 (T4) 和三碘甲腺原氨酸 (T3),具有 調(diào)節(jié)動(dòng)物體生長發(fā)育、基礎(chǔ)代謝及繁殖活動(dòng)的重要生理功能;

材料

器械滅菌:

手術(shù)器械: 2把眼科直剪,2把彎鑷、2支左右1.5mL離心管、6cm10cm Dish;

溶液準(zhǔn)備:

1DMEM/F12 (含有20%FBS)培養(yǎng)基,37度水浴溫育;

2雙抗PBS、75%的酒精

3II型膠原酶、I型膠原酶、中性蛋白酶、胰酶

方法

1、取 6-8 周齡的雄性小鼠,處死小鼠,,75%的酒精,取出與氣管相連的甲狀腺組織,置于預(yù)冷無菌含雙抗的PBS緩沖液中浸泡洗滌,并剝離甲狀腺組織;

2、在冰上用解剖剪機(jī)械剪碎甲狀腺組織,大小約1mm3左右的碎塊;

3、將剪碎的組織加入預(yù)熱的 4-5 倍體積的消化混合液,于 37℃震蕩消化 30-40min,震蕩頻率為250-300/min;所述消化混合液包括0.05-0.1% 胰酶、0.1-0.2I型膠原酶、0.05-0.15II型膠原酶和 1-2U/mL中性蛋白酶;

4、吹打使細(xì)胞分散,經(jīng) 200 目篩網(wǎng)過濾后,加入至含 Ficoll的分離液中,2000rpm/min離心,取中間白色層,1500rpm/min離心5min,棄上清;

5、PBS清洗2次,細(xì)胞種盤;

 

【培養(yǎng)】

DMEM20%FBS或干細(xì)胞專用培養(yǎng)液

 

【鑒定】

1)免疫熒光:

陽性:Cytokeratin-18;

 


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