兔胰腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定

【簡(jiǎn)介】

上皮細(xì)胞覆蓋于身體表面并襯貼于體內(nèi)空腔器官腔面的細(xì)胞，上皮細(xì)胞具有強(qiáng)大的角生和更新能力。上皮組織具有保護(hù)、吸收、分泌和排泄等作用。當(dāng)上皮細(xì)胞受損時(shí)，則影響機(jī)體的防御功能；胰腺的內(nèi)分泌物主要有胰島素、胰高血糖素、胃泌素及生長(zhǎng)抑素等，與機(jī)體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)代謝及調(diào)節(jié)有關(guān)；

【材料】

動(dòng)物：2-20周齡兔；

器械耗材：手術(shù)剪、手術(shù)鑷、 15ml離心管試劑、75%酒精、DMEM、雙抗、PBS、膠原酶、胰蛋白酶、上皮專用培養(yǎng)液；

【方法】

膠原酶聯(lián)合胰酶消化法

1）兔處死，取出胰腺組織，剪碎，PBS清洗；

2）組織碎塊加入混合酶進(jìn)行消化，組織消化完后收集細(xì)胞懸液；

3）細(xì)胞懸液離心，收集沉淀，再用PBS重懸離心；

4）上皮專用培養(yǎng)液種細(xì)胞，37℃,5co2，48小時(shí)首換液；

【培養(yǎng)】

上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液；

【鑒定】

1）免疫熒光

陽(yáng)性：角蛋白18（Cytokeratin 18）

陰性：vimentin