兔角膜上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定

【簡(jiǎn)介】

角膜由角膜上皮細(xì)胞、前彈力膜、角膜基質(zhì)、后彈力膜和角膜內(nèi)皮細(xì)胞5層結(jié)構(gòu)組成,其中,角膜上皮細(xì)胞和角膜內(nèi)皮細(xì)胞為其主要成分,它們?cè)诰S持角膜正常結(jié)構(gòu)和功能中起著重要作用；角膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng),是現(xiàn)代角膜病基礎(chǔ)學(xué)研究的重要方法之一,對(duì)研究角膜的生理、病理、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都有極大的意義；

【材料】

3-8周齡兔、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗、PBS、DMEM/F12、FBS、培養(yǎng)皿、上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液；

【方法】

1）處死，去除頭部皮毛，取出眼球組織；

2）從眼球組織中分離出眼角膜組織；

3）眼角膜組織PBS清洗干凈；

4）組織外壁貼盤(pán)，2h后加入上皮專用培養(yǎng)液，2-3d細(xì)胞爬出；

【培養(yǎng)】

上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液

【鑒定】

1)免疫熒光

陽(yáng)性：Cytokeratin 18

陰性：vimentin