兔胃底成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)

【簡(jiǎn)介】

體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞多為梭形、多角形和扁平星形等，其形態(tài)尚可依細(xì)胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變，成纖維細(xì)胞是功能活動(dòng)旺盛的細(xì)胞，細(xì)胞和細(xì)胞核較大，輪廓清楚，核仁大而明顯，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)；

【材料】

培養(yǎng)皿，手術(shù)剪，彎頭手術(shù)鑷，10%FBS的DMEM-G，雙抗PBS或Hanks，75%酒精；

【方法】

1）取胃組織，預(yù)冷雙抗PBS 或Hanks沖洗3~4次；

2）刮除內(nèi)膜，鈍性分離外膜，取外模纖維層，剪碎成1mm³組織塊；

3）將組織塊用無血清培液重懸，1000RPM/3min，棄上清；

4）組織塊移入培養(yǎng)皿，少量培液濕潤，放入37°培養(yǎng)；

5）靜置3d后換液，4d左右會(huì)有細(xì)胞出，細(xì)胞擴(kuò)增后隔天換一次培液，20%FBS的DMEM可很好的培養(yǎng)細(xì)胞；

【培養(yǎng)】

10%FBS的DMEM-G

【鑒定】

1）免疫熒光：

陽性：vimentin

陰性：α-SMA、Desmin