兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定

【簡(jiǎn)介】

脂肪干細(xì)胞是從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞。主要恢復(fù)組織細(xì)胞的修復(fù)功能，促進(jìn)細(xì)胞的再生，恢復(fù)年輕面容的同時(shí)，身體機(jī)能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。

【材料】

2把眼科直剪，1把彎鑷、2支左右15mL離心管、6cm或10cm Dish、70um網(wǎng)篩、含10%FBS 的DMEM干細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基、雙抗PBS、75%的酒精、0.06%膠原酶I；

【方法】

1）白兔用速眠新以0．2 mL／kg的劑量麻醉；

2）切取腹股溝處脂肪組織，去除肉眼可見(jiàn)的血管和筋膜組織，PBS沖洗；

3）剪成1mm³的組織塊，移入15ml離心管，加入0.06%膠原酶I，37°溫箱消化50min；

4）消化后向管內(nèi)加1~2倍體積PBS吹打消化液，過(guò)70um篩網(wǎng)，1000RPM/5min，棄上清和脂肪層，再加入PBS重懸細(xì)胞沉淀重復(fù)離心1~2次；（離心管內(nèi)會(huì)有很多油，PBS清洗多次還是去除不掉，重懸細(xì)胞沉淀時(shí)多注意，盡量避免脂肪混合培液）

5）專(zhuān)用培養(yǎng)液重懸后移入培養(yǎng)皿，37°溫箱，5%CO₂培養(yǎng)，24h后PBS清洗換液；

代;

【培養(yǎng)】

干細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)液

【鑒定】

流式細(xì)胞鑒定：

陽(yáng)性：CD29、CD90、CD44、CD105、CD166、CD13;

陰性：CD34、CD45、CD80、CD86、CD117;