兔肺成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定

【簡(jiǎn)介】

體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞多為梭形、多角形和扁平星形等，其形態(tài)尚可依細(xì)胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變，成纖維細(xì)胞是功能活動(dòng)旺盛的細(xì)胞，細(xì)胞和細(xì)胞核較大，輪廓清楚，核仁大而明顯，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)；

【材料】

75%酒精、PBS、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、EP管、含15%FBS的DMEM（或1640）；

【方法】

1、處死兔，開胸腔，取肺組織；

2、PBS洗凈血液，剪碎組織，PBS清洗400R/3min，兩次以上，上清清澈為止；

3、剪碎的組織塊加入0.25%的DNaseⅠ4ml，再加入0.25%的胰蛋白酶消化組織碎塊20min，消化后吸打消化液，靜置2min，取上清，未消化的組織再次加酶液消化20min；

4、取得的上清合為一管，加等量含血清培液終止消化，依次過70um、40um網(wǎng)篩，細(xì)胞懸液1500r / 5min，棄上清，加培液再次離心一次，培液重懸沉淀；

5、細(xì)胞懸液種入培養(yǎng)皿，37°靜置培養(yǎng)30-60 min后輕輕傾斜培養(yǎng)皿，去懸液，補(bǔ)足培液繼續(xù)培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞為肺成纖維細(xì)胞；

【培養(yǎng)】

DMEM/F12+10%FBS+1%雙抗

【鑒定】

陽性：波形蛋白（Vimentin）；肌動(dòng)蛋白（α-MSA）；