豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的分離培養(yǎng)

【簡(jiǎn)介】

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，對(duì)骨髓中的造血干細(xì)胞（HSC）不僅有機(jī)械支持作用，還能分泌多種生長(zhǎng)因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來支持造血。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潛能，能促進(jìn)間充質(zhì)組織的再生，如：骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質(zhì)等組織;

【材料】

2-6周鼠，超凈臺(tái)、PBS、廢液桶、75%酒精、手術(shù)包、percoll分離液、培養(yǎng)基、培養(yǎng)瓶等；

【方法】

1）豚鼠處死后, 放入75% 的酒精內(nèi)浸泡15 min，無菌條件下取出雙側(cè)股骨、脛骨、肱骨，去除附帶組織,浸入生理鹽水中清洗2次；

2）無菌間內(nèi)，超凈臺(tái)上，將長(zhǎng)骨從中間剪斷，無血清DMEM沖出骨髓，裝入兩離心管中以1000rpm×5min離心，去除上清；

3）4ml無血清DMEM重懸，輕鋪于等量的密度1.073g/ml Percol 分離液上（4ml:4ml），3000rpm×30min離心，小心吸取中間白膜層，無血清DMEM10倍體積稀釋，1000rpm×4min離心2遍；

4）干細(xì)胞專用培養(yǎng)液重懸種盤；

【培養(yǎng)】

干細(xì)胞專用培養(yǎng)液

【鑒定】

四、鑒定

免疫熒光：

陽(yáng)性：CD44、CD90；

陰性：CD34、CD45;

功能鑒定：

成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)；