豚鼠耳神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定

【簡介】

神經(jīng)節(jié)細(xì)胞較大，直徑可達(dá)30微米，形態(tài)可為圓形、卵圓形、梨形，類似中樞神經(jīng)系者含有清晰的圓形或橢圓形核及明顯的核仁，尼氏小體發(fā)育良好。

【材料】

成年豚鼠、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、雙抗、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、DMEM、PBS、D-Hanks、0.2% II型膠原酶、0.2% dispase II；

【方法】

1）處死豚鼠，取神經(jīng)節(jié)，PBS清洗；

2）組織加入0.2% II型膠原酶和0.2% dispase II，37℃消化30min；

3）1000rpm/min離心5min，加入酶，從新消化20min，重復(fù)2次；

4）1000rpm/min離心5min后去除上清.重新加入無血清限制性培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,輕輕吹打10次.靜置2min后,將上面細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到另一離心管.余下組織塊多次重復(fù)上述過程,直至組織塊基本消散為止；

5）細(xì)胞沉淀接種于多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)皿中，3天換一次液；

【培養(yǎng)】

神經(jīng)元專用培養(yǎng)液（2%B-27+20ug/ml NGF+DMEM/F12）

【鑒定】

1）免疫熒光：

陽性：NF,C-FOS